Els problemes i solucions comuns en el procés de síntesi de pèptids inclouen els aspectes següents:
Contingut de pèptids: el contingut de pèptids es refereix al percentatge de substàncies pèptids d'una mostra en relació amb les substàncies no peptídiques. En els productes pèptids, a més del propi pèptid, també s'inclouen components no salins introduïts durant el procés de producció, com ara aigua, dissolvents absorbits, ions de coordinació i sals.
Estabilitat química:
Reacció de desamidació: els residus d'Asn/Gln s'hidrolitzen fàcilment per formar Asp/Glu.
Hidròlisi: els enllaços peptídics dels pèptids es trenquen fàcilment per hidròlisi, especialment els formats per la participació d'Asp, especialment els enllaços peptídics Asp Pro i Asp Gly.
Reacció de racemització: tots els residus d'aminoàcids excepte Gly tenen àtoms de carboni alfa quirals i són propensos a la reacció de racemització sota catàlisi alcalina. Els residus d'ASP són els més propensos a les reaccions de racemització.
- degradació per eliminació: Cys, Ser, Thr, Phe, Tyr i altres residus es poden degradar mitjançant - eliminació, que és més probable que es produeixi a pH alcalí i es veu afectada per la temperatura i els ions metàl·lics
Estabilitat física:
Desnaturalització, adsorció, agregació o precipitació: la desnaturalització de pèptids sol estar relacionada amb la destrucció de les estructures terciàries i secundàries. En estat desnaturalitzat, els pèptids són més propensos a reaccions químiques i la seva activitat és difícil de recuperar. L'intermedi format durant el procés de desnaturalització té poca solubilitat i és propens a l'agregació i la precipitació
conservació:
Millors condicions d'emmagatzematge: els pèptids s'emmagatzemen generalment en forma de pols liofilitzat, que és molt estable a -20 graus, especialment després de la liofilització i s'emmagatzemen en un assecador de -20 graus. La majoria dels pèptids es poden emmagatzemar a aquesta temperatura durant diversos anys sense canvis. Per reduir l'impacte de la humitat, els pèptids liofilitzats s'han de restaurar a temperatura ambient en condicions seques abans d'exposar-los a l'aire.
Embalatge: Hesheng Biotechnology recomana envasos petits per evitar cicles repetits de congelació-descongelació, reduir el nombre d'obertures i tancaments de contenidors, reduint així les possibilitats de manipulació inadequada o contaminació bacteriana i assegurant l'estabilitat dels pèptids.
Prova de puresa:
Garantia de puresa: tots els pèptids lliurats han assolit la puresa requerida i es descartaran els pèptids que no compleixin l'estàndard. Els resultats de detecció de HPLC i MS poden verificar la puresa i el pes molecular del pèptid, alhora que mostren les impureses principals.
Altres mètodes de detecció, com l'anàlisi d'aminoàcids o l'anàlisi elemental, poden confirmar la composició d'aminoàcids dels pèptids com a mitjà suplementari de confirmació de pèptids.
Tecnologia de síntesi:
Síntesi de pèptids en fase sòlida: la síntesi de pèptids en fase sòlida no requereix purificació de productes intermedis, permetent processos de síntesi continus i posant les bases per a l'automatització de la síntesi de pèptids. A partir de la síntesi química de Fmoc, el pèptid objectiu es va sintetitzar enllaçant de manera covalent el grup carboxil de l'aminoàcid C-terminal amb una resina de polímer insoluble, i després començant des del grup amino de l'aminoàcid.
El contingut anterior resumeix els problemes comuns i les contramesures en la síntesi de pèptids, abastant múltiples aspectes com ara l'estabilitat química, l'estabilitat física, les condicions d'emmagatzematge, les proves de puresa, etc.